酶聯免疫吸附實驗（ELISA）是一種廣泛應用測定樣本中的蛋白、抗體或激素的的免疫分析技術。ELISA將蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入含有待測抗體，形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶標記了，可以直接來檢測抗原的量，如沒有，則可以用酶標二抗來測定抗原的量。加入酶的底物，底物產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原呈正比的關系，依此原理計算出樣本的抗原總量和濃度。結合ELISA原理，ELISA分為4種方法，每種方法優缺點不同。下面通蔚生物為大家詳細介紹一下。
將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的抗體，即可測定抗原總量。
優勢：直接elisa法操作簡單，因不需要二抗，避免交叉反應
缺勢：實驗中一抗需酶標，并不是所有抗體都需要酶標，成本相對較高
此方法和直接ELISA法區別不是很大，多了酶標二抗，用酶標二抗去辨識一抗來測定抗原的量。
優勢：二抗可以加強信號
缺勢：交叉反應發生機率較高
被檢測的抗原包被在2個抗體之間，其中一個抗體將抗原固定于固相載體上，既捕捉抗體。另一個是檢測抗體，此抗體可以用酶標記后直接測定抗原的量；或者不標記，在使用酶標二抗來測定抗原的量。這2種抗體要小心選擇，才可避免交叉反應或競爭相同抗原結合部位。
優勢：高靈敏、高專一性、抗原無須事先純化。
缺勢：抗原一定要擁有兩個以上抗體結合部位
樣本里的抗原和純化并固定在固相載體上的抗原一起競爭相同的抗體，當樣品中的抗原越多，就可以結合越多的抗體，而固定的抗原就只能結合較少的抗體，
優勢：可適用比較不純的樣本，而且數據再現性很高。
缺勢：整體的敏感性和專一性都較差。
上述是ELISA實驗4種較為常見的方法優缺點對比。每種方法對應不同實驗需求和樣本，才能事半功倍。
在線咨詢